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基质金属蛋白酶2(MMP2)是一种锌依赖性酶,能切割细胞外基质成分,属于基质金属蛋白酶(MMP)家族。MMP2,又称明胶酶A或72kDa Ⅳ型胶原酶,能在一定条件下水解明胶。
实验原理:
利用明胶酶谱法验证MMP-2的活性,灵敏度高达10pg。电泳时,SDS与样本中的MMP2可逆性结合,导致MMP2氢键和疏水键被破坏而不能发挥分解明胶的作用。后将胶置于复性缓冲液,MMP2恢复活性,在其迁移位置水解凝胶中的明胶,CCB染色后会出现白色条带,其强弱与MMP2活性呈正比。
实验方法:
分别将不同浓度的MMP2(500ng、125ng、63ng、32ng、16ng)进行非还原十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE;10%凝胶含1mg/mL明胶)电泳。经复性、孵育和CCB染色后,活性MMP2能在凝胶附近水解明胶,凝胶上会出现白色条带。本实验以热变性MMP2蛋白为阴性对照,血样为阳性对照。
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